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高速離心機(jī)分析性離心原理介紹

更新時(shí)間:2012-10-23      點(diǎn)擊次數(shù):5059
  高速離心機(jī)分析性超速離心不同于制備性超速離心,分析性超速離心主要是為了研究生物大分子的沉降特征和結(jié)構(gòu),而不是實(shí)際的收集一些特殊的部分。因此,它使用了特殊設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)子和檢測(cè)系統(tǒng),以便連續(xù)地監(jiān)視物質(zhì)在一個(gè)離心場(chǎng)中的沉降過程。分析性超速離心在生物學(xué)方面的應(yīng)用,包括測(cè)定生物大分子的分子量、估價(jià)樣品的純度和檢測(cè)大分子構(gòu)型的變化。
  
  高速離心機(jī)分析性離心可以在約70000轉(zhuǎn)/分的速度進(jìn)行操作,產(chǎn)生高達(dá)500000g的離心場(chǎng)。高速離心機(jī)分析性離心主要由一個(gè)橢圓形的轉(zhuǎn)子組成,這轉(zhuǎn)子通過一個(gè)有柔性的軸聯(lián)接到一個(gè)高速的驅(qū)動(dòng)裝置上,這種軸可使轉(zhuǎn)子在旋轉(zhuǎn)時(shí)形成它自己的軸。轉(zhuǎn)子在一個(gè)冷凍的和真空的腔中旋轉(zhuǎn)。轉(zhuǎn)子能容納兩個(gè)小室:一個(gè)分析室和一個(gè)配衡室。這些小室在轉(zhuǎn)子中始終保持著垂直的位置。配衡室是一個(gè)經(jīng)過精密加工的金屬塊,作分析室的平衡用。在配衡室上鉆通二個(gè)孔(它們離開旋轉(zhuǎn)中心的距離是經(jīng)過標(biāo)定的)。這些定標(biāo)是用來確定分析室中的距離。分析室(通常的容量是1毫升)是扇形的,當(dāng)它正確地排列在轉(zhuǎn)子中時(shí),盡管處于垂直的位置,但是它的原理卻和一個(gè)水平式轉(zhuǎn)子相同,產(chǎn)生了一個(gè)十分理想的沉降條件。分析室有上下二個(gè)平面的石英窗(如圖1)。
  
  超高速離心機(jī)中裝有一個(gè)光學(xué)系統(tǒng),在整個(gè)離心期間都能觀察小室中沉降著的物質(zhì)。在預(yù)定的時(shí)間可以拍攝沉降物質(zhì)的照片。可以通過紫外光的吸收(如對(duì)蛋白質(zhì)和DNA)或者折射率上的不同(如Schlieren系統(tǒng)或Rayteigh干涉量度法)對(duì)沉降物進(jìn)行監(jiān)視。后面這些方法是利用了這樣一個(gè)現(xiàn)象,即當(dāng)光線通過一個(gè)具有不同密度區(qū)的透明液體時(shí),在這些區(qū)帶的界面上使光發(fā)生了折射。在分析室中物質(zhì)沉降的情況下,在重顆粒和輕顆粒之間形成的界面就像一個(gè)折射的透鏡,結(jié)果在檢測(cè)系統(tǒng)的照相底板上產(chǎn)生了一個(gè)“峰”。由于沉降不斷進(jìn)行,界面向前推進(jìn),因此峰也移動(dòng)了。從峰移動(dòng)的速度可以得到物質(zhì)沉降速度的一個(gè)指標(biāo)。

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